В общем случае, приготовление тотальных препаратов включает три основных этапа: фиксация объекта, окраска и обезвоживание в спиртах с последующим заключением в бальзам или другую заливочную среду.
Из фиксаторов наиболее распространенный – жидкость Буэна:
- насыщенный раствор пикриновой кислоты – 150 см3;
- формалин 40% – 50 см3;
- ледяная уксусная кислота – 10 см3.
Окраска препаратов:
Железный гематоксилин Гейденгайна. Из воды препарат поместить в 3% железо-аммиачные квасцы на 6-24 ч., затем сполоснуть водой и поместить в железный гематоксилин на 12-24 ч. Затем перед дифференцировкой на 0.5-1 ч. в водопроводную воду, дифференцировать 1.5% раствором железо-аммиачных квасцов при непрерывном контроле под микроскопом, отмыть водой.
Хорошо окрашивает ядра и многие другие цитоплазматические структуры в темно-синий цвет.
Окрашивание нуклеиновых кислот по Фельгену. Специфическая реакция, широко применяемая гистологами и цитологами для окрашивания клеточных ядер и хромосом. Реакция Фельгена основана на том, что продукты неполного гидролиза ДНК восстанавливают цвет основного фуксина, обесцвеченного сернистой кислотой. Для осуществления этой реакции препарат после удаления воды гидролизуют 1 н. НСl (8.5 мл концентрированной соляной кислоты в 100 мл дистиллированной воды) при 60°С. После промывки холодной дистиллированной водой, материал помещают на 1-2 ч. в сернистокислый фуксин, приготовленный из насыщенного при подогреве раствора основного фуксина (0.5 г фуксина в 100 мл кипящей воды), к которому по охлаждении добавляют 1 г NaHSO3 и 10-20 мл 1 н. НСl. Через 24 ч. раствор отмывают. После окрашивания материал промывают водой с SO2 (100 мл воды, 5 мл 1 н. НСl и 1 г NaHSO3), затем чистой водой.
Литература:
- Иванов А.В., Мончадский А.С., Полянский Ю.И., Стрелков А.А. Большой практикум по зоологии беспозвоночных (в 3-х частях). Ч.1. Издательство: Высшая школа, 1981-1985. 1450 с.