1. Образец природной воды с находящимися в ней микроорганизмами тщательно обследуют под бинокуляром. В микроаквариум ("солонку") вносят 0.5-1 мл исследуемой воды без инфузорий. С помощью капиллярной пипетки отбирают клетки парамеций и помещают в микроаквариум.
2. Клетки парамеций необходимо отмыть от сопутствующих микроорганизмов. Для этого с помощью капиллярной пипетки клетки из исходного микроаквариума переносят по одной в микроаквариум с бактериальной средой, используемой для кормления парамеций (0.5-1 мл). Процедуру повторяют еще 2-4 раза.
3. Для получения клонов парамеции переносят в многолунковые стекла: в каждую лунку добавляют по 30-50 мкл (1-2 кап) бактериальной среды, после чего в каждую лунку вносят по одной клетке парамеции. Просматривают заполненные лунки, контролируя, чтобы в каждой находилось только по одной парамеции.
4. Многолунковое стекло помещают во влажную камеру.
5. Факт клонирования записывают в рабочий журнал с указанием происхождения материала.
6. На следующий день стекла просматривают и записывают количество клеток в каждой из лунок. При необходимости добавляют бактериальную среду (1-2 кап).
7. Стекла регулярно просматривают и при необходимости подкармливают. Когда количество парамеций в лунке достигнет 12-14, их можно переводить в пробирку.
8. Для этого в пробирку вносят 200-250 мкл среды с бактериями и туда с помощью капиллярной пипетки переносят всех находящихся в данной лунке парамеций. В рабочем журнале записывают индекс полученного клона и тот же индекс указывают на пробирке.
9. Новые клоны подкармливают через день-два, в зависимости от темпа роста культуры парамеций.
Данная методика подходит и для клонирования других видов инфузорий.
Литература:
Sonneborn, T.M., 1970. Methods in Paramecium research. In: Prescott, D.M. (Ed.), Methods in Cell Physiology, vol. 4. Academic Press, New York, London, pp. 241–339.