Конфокальный микроскоп на основе вращающегося диска (диска Нипкова, spinning-disk confocal) Zeiss Cell Observer SD является инструментом выбора для приложений, имеющих дело с изучением быстро протекающих процессов внутри живых клеток. В отличие от сканирующей лазерной конфокальной микроскопии, конфокальный микроскоп на основе диска Нипкова позволяет достичь высоких скоростей сканирования с приемлемым контрастом и минимальной фототоксичностью в обмен на определённую потерю в разрешении и необходимость использования тонких (~10 мкм) препаратов.
Прибор может быть использован для:
- • высокоскоростной съёмки динамических процессов в клетках,
- • долговременной цейтраферной съёмки с минимальной фототоксичностью,
- • приложений, где важна чувствительность и скорость в обмен на разрешение.
Размещение: Василеостровская площадка.
Статус: эксплуатация в рабочем режиме.
Основные технические характеристики
Тип микроскопа – инвертированный, моторизованный.
Методы исследования: в проходящем свете – по методу светлого поля и дифференциально-интерференционного контраста; в отраженном свете – по методу эпи-флюоресценции.
Механизм фокусировки – величина шага по оси Z 10 нм, моторизованный привод.
Предметный стол, моторизованный, с диапазоном перемещений по координатам Х и У – 110x90 мм.
Револьверное устройство для модулей дополнительного увеличения, моторизованное, содержит 3 позиции и имеет модуль дополнительного увеличения 1.6х.
Конденсор моторизованный, с числовой апертурой 0.55.
Мощность галогенного источника проходящего света – 100 Вт.
Мощность металлогалогенной лампы для флуоресцентного метода исследования – 120 Вт.
Параметры светодиодных источников – светодиодные люминесцентные осветители обеспечивают длины волн: 365 нм, 470 нм, 540-580 нм, 590 нм и др., обладают высокой скоростью переключения линий.
Параметры барьерных светофильтров – светофильтры осуществляют деление светового пучка на длинах волн 425 нм, 490 нм, 565 нм и др.
Набор люминесцентных светофильтров для "синей" люминесценции под стандартные флуорохромы: возбуждающий светофильтр G 365 нм; запирающий полосовой (BP, band pass) светофильтр BP 445/50 нм.
Набор люминесцентных светофильтров для "зеленой" люминесценции под стандартные флуорохромы: возбуждающий светофильтр BP 470/40 нм; запирающий светофильтр BP 525/50 нм.
Набор люминесцентных светофильтров для "красной" люминесценции под стандартные флуорохромы: возбуждающий светофильтр BP 550/25 нм; запирающий светофильтр BP 605/70 нм.
Набор люминесцентных светофильтров для "красной" люминесценции под стандартные флуорохромы: возбуждающий светофильтр BP 560/40 нм; запирающий светофильтр BP 630/75 нм.
Набор люминесцентных светофильтров под несколько стандартных флуорохромов: возбуждающий светофильтр BP 470/27, BP 556/25 нм; запирающий светофильтр BP 512/30, BP 630/98.
Набор люминесцентных светофильтров под стандартные флуорохромы: возбуждающий светофильтр BP 370/40, BP 474/28, BP 585/35 нм, запирающие светофильтры BP 425, 527, 615.
Увеличения: 5х, 10х, 25х, 40х, 63х, 100х и др.
Характеристики объектива 5х: объектив планахроматический 5х, обладает числовой апертурой 0.13 и рабочим расстоянием 5.5 мм.
Характеристики объектива 10х: объектив планахроматический, обладает числовой апертурой 0.25 и рабочим расстоянием 6.0 мм.
Характеристики объектива 25х: объектив планапохроматический 25х, мультиммерсионный (масляный, водный, глицериновый), обладает числовой апертурой 0.8 и рабочим расстоянием 0.57 мм, а также коррегирующим кольцом для компенсации сферической аберрации, вносимой предметными и покровными стеклами нестандартной величины.
Характеристики объектива 40x: объектив планапохроматический 40x водной иммерсии, обладает числовой апертурой 1.1 и увеличенным рабочим расстоянием 0.62 мм, а также коррегирующим кольцом для компенсации сферической аберрации, вносимой предметными и покровными стеклами нестандартной величины.
Характеристики объектива 63x: объектив планапохроматический 63x масляной иммерсии, обладает числовой апертурой 1.4 и увеличенным рабочим расстоянием 0.18 мм, а также коррегирующим кольцом для компенсации сферической аберрации, вносимой предметными и покровными стеклами нестандартной величины.
Характеристики объектива 100x: объектив планапохроматический 100x масляной иммерсии, обладает числовой апертурой 1.46 и увеличенным рабочим расстоянием 0.10 мм, а также коррегирующим кольцом для компенсации сферической аберрации, вносимой предметными и покровными стеклами нестандартной величины.
Реализация ДИК – методика ДИК реализована на объективах 25х, 40х, 63х, 100х.
Модуль для конфокального многоточечного лазерного сканирования на основе тандема вращающихся дисков – диск с микроотверстиями (диаметр отверстия – 50 мкм, расстояние между отверстиями – 250 мкм) и диск с микролинзами, фокусирующими сканирующий луч на микроотверстия.
Время экспозиции цифровой камеры и скорость вращения тандема дисков координированы друг с другом с помощью программного обеспечения.
Скорость вращения диска – до 5000 оборотов/мин, изменение скорости вращения осуществляется автоматически, с помощью программного обеспечения.
Время смены эмиссионных светофильтров – 33 мс.
Возможность использования до 4 лазерных линий.
Возбуждение флюоресценции осуществляется с помощью:
лазера с длиной волны 405 нм под стандартные красители с мощностью 50 мВт,
лазера с длиной волны 488 нм под стандартные красители с мощностью 100 мВт,
лазера с длиной волны 561 нм под стандартные красители с мощностью 40 мВт,
лазера с длиной волны 635 нм под стандартные красители с мощностью 30 мВт.
Системы микроклимата для поддержания постоянства температуры, уровня влажности и СО2.
Микроскоп укомплектован вынесенным устройством управления всеми моторизованными элементами, которое позволяет управлять микроскопом, не нарушая параметры атмосферы CO2 в устройстве культивирования биологических объектов.
Цифровая видеокамера высокого разрешения №1 – для реализации широкопольного режима документации 1388 (В) х 1040 (Г) = 1.4 Мпкс.
Спектральный диапазон чувствительности сенсора – в диапазоне 400-950 нм.
Оцифровка – 12 бит на каждый цифровой канал.
Время интеграции (накопление) – от 1 миллисекунды до нескольких минут.
Крепление камеры, способ крепления камеры к микроскопу – через C-mount адаптер.
Охлаждение камеры осуществляется на основе элемента Пельтье.
Цифровая видеокамера высокого разрешения №2 и №3 – для реализации двухканального режима конфокальной микроскопии Rolera EMc2.
Принцип работы
http://micro.magnet.fsu.edu/primer/techniques/fluorescence/spinningdisk/index.html
