ddPCR (от англ. "droplet digital PCR" – цифровая ПЦР в каплях) – это третье поколение в технологиях ПЦР. ddPCR позволяет измерять абсолютное количество искомой ДНК в образце с разрешением в 1 молекулу. Система ddPCR BioRad QX100 включает модуль для создания микрокапель, модуль для их чтения и компьютер для анализа полученных данных. Для проведения амплификации имеется термоциклер BioRad C1000.
Система ddPCR может быть использована для:
- • изучения изменчивости по копийности участков ДНК (CNV),
- • детекции редких молекул,
- • детекции мутаций,
- • анализа экспрессии генов.
Размещение: Петергофская площадка.
Статус: эксплуатация в рабочем режиме.
Основные технические характеристики
| Стартовый объём образца, мкл | 20 |
| Ёмкость генератора капель QX100, образцов/картридж | 8 |
| Количество капель на образец | 20 000 |
| Производительность модуля чтения капель QX100, лунок/ч | 32 |
| Освещение образца | светодиоды |
| Детекция образца | фотоумножитель |
| Каналы детекции | FAM, VIC |
| Линейный динамический диапазон | 5 порядков |
| Точность | ±10% |
| Количество капель на 96-луночный планшет, млн. | 1.4 |
Принцип работы
Реакционная смесь разбивается на тысячи микрореакторов (капель) за счёт создания эмульсии реакционной смеси в масле. В результате случайного распределения молекул ДНК по каплям каждый микрореактор содержит 0 либо 1 копию искомой ДНК. При проведении ПЦР амплификация целевой ДНК происходит независимо в каждой капле. Амплификацию проводят с использованием специфических меченных зондов. После проведения ПЦР модуль для чтения капель последовательно сканирует каждую каплю и подсчитывает количество пустых капель и капель, где прошла амплификация. Количество положительных капель отражает концентрацию искомой ДНК в образце.
Требования к образцам
Как для обычной ПЦР.
