Система для проведения изоэлектрического фокусирования с последующей элюцией BioRad Rotofor Cell.
Назначение. Изоэлектрофокусирование (т.е. фокусирование на изоэлектрической точке) позволяет разделить белковую / пептидную смесь на группы компонентов с общим pI. Препаративный вариант ИЭФ позволяет собрать эти группы компонентов и использовать для дальнейшего анализа. При выборе подходящего диапазона рН возможно разделение двух модификаций одного и того же белка (например, фосфорилированной / нефосфорилированной форм). Напротив, крупные белки с выраженными гидрофобными доменами не разделяются посредством IEF – они создают "шум", т. к. обладая ограниченной подвижностью, не формируют четкой зоны. Таким образом могут быть разделено значительное количество белка – до нескольких грамм (проба при этом "загрязняется" амфолитами).
Размещение: Василеостровская площадка.
Статус: эксплуатация в рабочем режиме.
Основные технические характеристики
- Препаративная фокусирующая камера объемом 60 мл – 1 шт.
- Препаративная фокусирующая камера объемом 18 мл – 2 шт.
Материал фокусирующих камер – акрил. - Керамическая система охлаждения.
Платиновые электроды – диаметром 0.25 мм. - Максимальное напряжение в ячейке – 3000 В.
Максимальная мощность – 15 Вт. - Возможность подключения охлаждающей циркуляционной системы с максимальной скоростью подачи охладителя 12 л/мин. Объем вводимого образца в диапазоне от 18 до 58 мл.
Вакуумное извлечение разделенных фракций. - Максимальное распределение белков по 20 фракциям.
Объем фракции – в диапазоне от 1.75 до 3 мл. - Источник питания.
- Стабилизация по току.
Стабилизация по напряжению. - ЖК-дисплей для отображения параметров.
Регулируемое выходное напряжение – в диапазоне от 20 до 5 000 В.
Регулируемая сила выходного тока – в диапазоне от 0.01 до 500 мА. - Выходная мощность – 400 Вт.
Память – 9 программ. - Таймер установки времени – до 99 ч. 59 мин.
Возможность подключения внешнего температурного датчика.
Дополнительно
Принцип работы
ИЭФ – разновидность зонального электрофореза, в котором белки разделяются в зависимости от величины pI в градиенте рН, образуя зоны. Проба наносится по всей длине ячейки, после приложения разницы потенциалов к полюсам ячейки белки двигаются в зависимости от имеющегося заряда в направлении одного из полюсов – до тех пор, пока не попадут в зону рН, равную по величине рI, где белок останавливается, т.к. становится нейтральным.
В препаративном варианте ИЭФ для создания градиента рН используют растворимые амфолиты, при этом ячейка поделена проницаемыми для белков мембранами на несколько отсеков, из которых собираются пробы с помощью вакуумного насоса.
Требования к образцам
Сбор фракций осуществляется из ячеек, разделенных мембранами, с помощью вакуумного насоса. Степень различий между фракциями определяется шириной выбранного диапазона рН (который, в свою очередь, – разбросом pI компонентов смеси).
Препаративному ИЭФ лучше подвергать не тотальные лизаты, которые слишком сложны по составу и могут содержать нефокусирующиеся компоненты (например, крупные гидрофобные белки), а их отдельные фракции.
