Методика использования прибора Quantus™ Fluorometer для РНК

Флуориметр Quantus является инструментом для измерения концентрации нуклеиновых кислот. Прибор используется с набором реагентов Promega QuantiFluor® Dye Systems.

Перед использованием прибора в первый раз, необходима калибровка прибора, также рекомендуется проводить калибровку перед началом использования каждого нового набора реагентов.

Подробная методика по использованию прибора: Quantus™ Fluorometer Operating Manual https://worldwide.promega.com/resources/protocols/technical-manuals/101/quantus-fluorometer-operating-manual-protocol/

Измерение РНК

Необходимые материалы:

  • 0.5 ПЦР-пробирки (тонкостенные ПЦР-пробирки Axygen PCR-05-C),
  • 20Х ТЕ буфер,
  • краситель RNA QuantiFluor®,
  • стандарт RNA QuantiFluor®.

Все реагенты и образцы должны быть приведены к комнатной температуре.

Калибровка прибора:

  1. Приготовить 1Х ТЕ буфер, разбавив 20Х ТЕ буфер в деионизованной воде.
  2. Приготовить рабочий раствор QuantiFluor®, смешав 1Х ТЕ буфер с красителем QuantiFluor® в соотношении 1:200 для образцов с высокой концентрацией и 1:1000 для образцов с низкой концентрацией.
  3. Приготовить верхний стандарт в 0.5 ПЦР-пробирке, смешав 5 мкл стандарта QuantiFluor®, 95 мкл 1Х ТЕ буфера и 100 мкл рабочего раствора QuantiFluor® для образцов с высокой концентрацией и 2 мкл стандарта QuantiFluor®, 98 мкл 1Х ТЕ буфера и 100 мкл рабочего раствора QuantiFluor® для образцов с низкой концентрацией.
  4. Приготовить нижний стандарт, смешав 1 мкл 1Х ТЕ буфера и 199 мкл рабочего раствора QuantiFluor®.
  5. Инкубировать стандарты 5 мин. при комнатной температуре.
  6. Выбрать нужный протокол в приборе, вставить нижний стандарт и нажать "Read Blank".
  7. Вставить верхний стандарт и нажать "Read Std".
  8. Сохранить калибровочные данные, нажав "Save".

Измерение концентрации образцов:

  1. В 0.5 ПЦР-пробирки добавить по 100 мкл рабочего раствора QuantiFluor®, нужный объем образцов (1-100 мкл) и довести объем в пробирках до 200 мкл 1Х ТЕ буфером.
  2. Выбрать нужный протокол, объем анализируемого образца и единицы концентрации на дисплее прибора.
  3. Поставить образец в прибор и закрыть крышку, концентрация образца будет показана на дисплее.