Описание прибора:
Прибор Applied Biosystems 7500 Real Time PCR предназначен для количественного определения нуклеиновых кислот и качественного определения последовательностей нуклеиновых кислот. Указанные типы анализов обеспечиваются с помощью флуоресцентно меченых реагентов для проведения ПЦР и анализа полученных результатов в режиме реального времени с использованием конечных данных и кривой диссоциации.
Реактивы и материалы:
- MicroAmp® Fast Optical 96-Well Reaction Plate with Barcode,
- TaqMan® GTXpress™ Master Mix,
- TaqMan® genotyping assay mix,
- ДНК.
Порядок действий при выполнении анализа:
- 1. Подготовка реакционного планшета.
- Отметить на схеме реакционного планшета расположение лунок с образцами.
Приготовить реакционную смесь в соответствии с таблицей:
- Нанести готовую смесь на реакционный планшет в выбранные для анализа лунки.
Добавить по 2 мкл ДНК в соответствующие лунки.
Закрыть лунки прозрачной пленкой.
До установки в прибор реакционный планшет следует хранить на льду.
- 2. Создать документа в программе ABI 7500 software.
- Выбрать в колонке Set Up раздел Advanced Setup.
В открывшейся вкладе ввести:
в строке Experiment Name – имя эксперимента,
прибор – 7500 Fast (96 Wells),
тип анализа – Genotyping,
используемые реагенты – TaqMan® Reagents,
скорость анализа: Fast.
Нажать клавишу "Next".
В открывшейся вкладке ввести количество и названия проб и мишеней.
Перейти в правую вкладку и определить положение проб, контролей и мишеней на планшете.
Нажать клавишу "Next".
В открывшейся вкладке ввести ввести: - объем реакционной смеси: 10 мкл,
- количество циклов: 40,
- а так же задать следующую программу для работы прибора:
После этого выбрать опцию File > Save As , ввести название документа, нажать на клавишу "Save".
Установить планшет в прибор.
Нажать на клавишу "Start run". После завершения цикла на экран выводится сообщение об успешно проведенном цикле или о допущенных ошибках.
- 3.Анализ данных.
- Для анализа данных нажать на клавишу "Analyze".
При необходимости отрегулировать вручную базовую линию и пороговое значение сигнала.
Просмотреть результаты анализа.
ВАЖНО! При анализе обратить внимание на параметры, помеченные желтыми флажками.