Флуориметр Quantus является инструментом для измерения концентрации нуклеиновых кислот. Прибор используется с набором реагентов Promega QuantiFluor® Dye Systems.
Перед использованием прибора в первый раз, необходима калибровка прибора, также рекомендуется проводить калибровку перед началом использования каждого нового набора реагентов.
Подробная методика по использованию прибора: Quantus™ Fluorometer Operating Manual https://worldwide.promega.com/resources/protocols/technical-manuals/101/quantus-fluorometer-operating-manual-protocol/
Измерение ДНК
Необходимые материалы:
- 0.5 ПЦР-пробирки (тонкостенные ПЦР-пробирки Axygen PCR-05-C);
- 20Х ТЕ буфер;
- краситель dsDNA QuantiFluor®;
- стандарт dsDNA QuantiFluor®.
Все реагенты и образцы должны быть приведены к комнатной температуре.
Калибровка прибора:
- Приготовить 1Х ТЕ буфер, разбавив 20Х ТЕ буфер в деионизованной воде.
- Приготовить рабочий раствор QuantiFluor®, смешав 1Х ТЕ буфер с красителем QuantiFluor® в соотношении 1:200.
- Приготовить верхний стандарт в 0,5 ПЦР-пробирке, смешав 2 мкл стандарта QuantiFluor®, 98 мкл 1Х ТЕ буфера и 100 мкл рабочего раствора QuantiFluor®.
- Приготовить нижний стандарт, смешав 1 мкл 1Х ТЕ буфера и 199 мкл рабочего раствора QuantiFluor®.
- Инкубировать стандарты 5 мин. при комнатной температуре.
- Выбрать нужный протокол в приборе, вставить нижний стандарт и нажать "Read Blank".
- Вставить верхний стандарт и нажать "Read Std".
- Сохранить калибровочные данные, нажав "Save".
Измерение концентрации образцов:
- В 0.5 ПЦР-пробирки добавить по 100 мкл рабочего раствора QuantiFluor®, нужный объем образцов (1-100 мкл) и довести объем в пробирках до 200 мкл 1Х ТЕ буфером.
- Выбрать нужный протокол, объем анализируемого образца и единицы концентрации на дисплее прибора.
- Поставить образец в прибор и закрыть крышку. Концентрация образца будет показана на дисплее.
