Микроорганизмы, инфузории

Бенкен К.А., Сабанеева Е.В. Санкт-Петербургский государственный университет

Fluorescence in situ hybridization with Trichorickettsia specific probe RickFla_430 (red) and eubacterial probe EUB338 (green), counterstained with DAPI (cyan). A – cytoplasmic bacteria in the strain CyL8-33

    
Окраска актина, с помощью TRITC-фаллоидина (красный)и хроматина, с помощью DAPI(синий).

Применение атомно-силовой микроскопии в исследовании организации макронуклеоза инфузорий

Атомно-силовая микроскопия (АСМ) позволяет получать информацию о поверхности биологических объектов без предварительной фиксации материала и строить трехмерное изображение объекта с высоким уровнем разрешения.

3D-реконструкция поверхности структур макронуклеуса инфузорий.

Ядро с ядрышками инфузории P. caudatum. Рельеф поверхности.

А, В – до обработки РНКзой. Б, Г – после обработки РНКазой. Д – 3D реконструкция поверхности ядрышка.

Линейкой показано расстояние от маркерной точки до ядрышек.

При исследовании организации ядерного материала применение АСМ в сочетании с ферментативной обработкой дает возможность определить природу анализируемой структуры, в частности, дифференцировать ДНП и РНП комплексы, а предварительная обработка фаллоидином, конъюгированным с биотином, с последующей инкубацией с комплексом стрептавидин-коллоидное золото позволяет определить локализацию ядерного актина в отдельных компартментах.

Ядро с ядрышком инфузории P. caudatum. Актин помечен комплексом с коллоидным золотом.
А – рельеф поверхности, Б-Г – 3D-реконструкция поверхности, головки стрелок показывают на комплексы фаллоидин-биотин-стрептавидин-золото.

Стрелка показывает на связь материала ядрышка и околоядрышкового хроматина.

Полученные трехмерные изображения экстрахромосомных ядрышек хорошо согласуются с данными трансмиссионной электронной микроскопии и подтверждают высказанную ранее гипотезу о субъединичном строении сложных ядрышек инфузорий. Субъединица ядрышка имеет бобовидную форму, а в ее центре располагается сферическое хроматиновое тельце. Обсуждается возможность получения трехмерного изображения микрохромосом макронуклеуса. /Sabaneyeva E., 1997. Arch. Protistenkd. 148: 365-373./

Atomic force microscopy of the bacteria isolated from P. calkinsi. A – 3D-reconstruction, B – Mag. Arrows show bacterial flagella.