Методики пробоподготовки

В общем случае, приготовление тотальных препаратов включает три основных этапа:фиксация объекта, окраска и обезвоживание в спиртах с последующим заключением в бальзам или другую  заливочную среду.

Из фиксаторов наиболее распространенный - жидкость Буэна:

Фиксирующая смесь: 1 вариант: 4 % глутаральдегид и 1 % OsO4 на 0.1 М какодилатном(или фосфатном) буфере (рН 7.4 или 7.2). Фиксацию проводят на тающем льду в темноте в течение 1 часа, с полной заменой фиксатора через 30 мин после начала фиксации. 2 вариант: 4 % глутаральдегид  на 0.1 М какодилатном (или фосфатном) буфере (рН 7.4 или 7.2) 3 вариант. Клетки префиксируют в парах OsOв течение 10-15 мин., затем фиксируют 4% глутаральдегидом.

В Ресурсном центре возможна реализация всех этапов подготовки материала для рутинных молекулярных исследований. Основной набор задач, который может быть решен на базе центра, сводится к определению нуклеотидной последовательности определенного участка генома изучаемого штамма. Это необходимо для: (1) Проверки степени очистки культивируемого штамма; (2) Идентификации культивируемого штамма с использованием молекулярных методов (в том числе, ДНК-штрихкодирования); (3) Определение положения культивируемого штамма на молекулярном филогенетическом древе.

Эти задачи решаются при помощи амплификации определенного участка генома изучаемого организма методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующей очисткой и, при необходимости, клонированием полученного продукта реакции (ампликона). Очищенный (клонированный) фрагмент ДНК передается пользователю и может быть использован для последующих процедур, в частности, чтения нуклеотидной последовательности методом Сэнгера.