Система для проведения изоэлектрического фокусирования с последующей элюцией BioRad Rotofor Cell

Назначение. Изоэлектрофокусирование (т.е. фокусирование на изоэлектрической точке) позволяет разделить белковую/пептидную смесь на группы компонентов с общим pI. Препаративный вариант ИЭФ позволяет собрать эти группы компонентов и использовать для дальнейшего анализа. При выборе подходящего диапазона рН возможно разделение двух модификаций одного и того же белка (например, фосфорилированной/нефосфорилированной форм). Напротив, крупные белки с выраженными гидрофобными доменами не разделяются посредством IEF - они создают "шум", т.к. обладая ограниченной подвижностью, не формируют четкой зоны. Таким образом могут быть разделены значительные количества белка - до нескольких грамм (проба при этом "загрязняется" амфолитами).

Размещение: василеостровская площадка

Статус: эксплуатация в рабочем режиме

 BioRad_Rotofor_Cell.jpeg

 

Основные технические характеристики

  Препаративная фокусирующая камера объемом 60 мл - 1 шт. Препаративная фокусирующая камера объемом 18 мл - 2 шт. 
Материал фокусирующих камер – акрил. Керамическая система охлаждения. 
Платиновые электроды - диаметром 0,25 мм. Максимальное напряжение в ячейке - 3000 В. 
Максимальная мощность - 15 Вт. Возможность подключения охлаждающей циркуляционной системы с максимальной скоростью подачи охладителя 12 л/мин. Объем вводимого образца в диапазоне от 18 до 58 мл. 
Вакуумное извлечение разделенных фракций. Максимальное распределение белков по 20 фракциям. 
Объем фракции в диапазоне от 1,75 до 3 мл. Источник питания. Стабилизация по току. 
Стабилизация по напряжению. ЖК-дисплей для отображения параметров. 
Регулируемое выходное напряжение в диапазоне от 20 до 5000 В. 
Регулируемая сила выходного тока в диапазоне от 0,01 до 500 мА. Выходная мощность 400 Вт. 
Память - 9 программ. Таймер установки времени, до 99 ч 59 мин. 
Возможность подключения внешнего температурного датчика. 
  
Дополнительно: ссылка на сайт компании производителя http://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/684c3b20-b5b6-4ada-a45a-820a9db12763/Rotofor_and_Mini_Rotofor_Cells 

Принцип работы

ИЭФ - разновидность зонального электрофореза, в котором белки разделяются в зависимости от величины pI в градиенте рН, образуя зоны. Проба наносится по всей длине ячейки, после приложения разницы потенциалов к полюсам ячейки белки двигаются в зависимости от имеющегося заряда в направлении одного из полюсов - до тех пор, пока не попадут в зону рН, равную по величине рI, где белок останавливается, т.к. становится нейтральным. 
     В препаративном варианте ИЭФ для создания градиента рН используют растворимые амфолиты, при этом ячейка поделена проницаемыми для белков мембранами на несколько отсеков, из которых собираются пробы с помощью вакуумного насоса.

Требования к образцам

Сбор фракций осуществляется из ячеек, разделенных мембранами, с помощью вакуумного насоса. Степень различий между фракциями определяется шириной выбранного диапазона рН (который, в свою очередь, разбросом pI компонентов смеси). 

Препаративному ИЭФ лучше подвергать не тотальные лизаты, которые слишком сложны по составу и могут содержать нефокусирующиеся компоненты (например, крупные гидрофобные белки), но их отдельные фракции.