Сканирующий спектрофлуориметр Agilent Cary Eclipse Назначение. Спектрофлуориметрия (= флуоресцентная спектроскопия) представляет собой мощный и информативный метод исследований, главным образом, динамических процессов в растворах. Однако может быть также использован для количественного и качественного анализов образцов. 

Основными оцениваемыми параметрами являются флуоресцентный спектр (по возбуждению или по эмиссии) и интенсивность флуоресценции, что позволяет проводить качественный и количественный анализ образцов соответственно - по характеристикам спектра можно идентифицировать флуорофор, по интенсивности флуоресценции определить его концентрацию (если она попадает на участок линейной зависимости, определяемые концентрации могут составлять нг/мл). Оценка данных параметров может иметь также и другие прикладные выходы - так, смещение максимума эмиссии может свидетельствовать об изменении окружения флуорофора (например, включении белка в мицеллы), а изменение интенсивности - о взаимодействии флуорофора с другой молекулой (например, краситель sybr green начинает флуоресцировать с большей интенсивность после взаимодействия с ДНК). 

Существуют также дополнительные параметры, измерение которых может характеризовать состояние образца: 
- флуоресцентная анизотропия, т.е. степень поляризованности флуоресцентного излучения после возбуждения поляризованным светом - характеризует степень подвижности флуорофора; может быть использовано для получения данных о жесткости содержащей флуорофор молекулы (например, стабильность белковой глобулы) или о включении ее в надмолекулярный комплекс и подвижности в этом комплексе (например, белков в липидном бислое); 
- скорость гашения флуоресценции, характеризует доступность флуорофора для агентов, влияющих на процесс флуоресценции - электрон-доноры (ОН, NH2 и пр.) увеличивают ее продолжительность, электрон-акцепторы (СООН, NO2 и пр.) - наоборот; так можно оценить, например, степень упакованности белковой глобулы (точнее доступность триптофановых остатков для действия внешних агентов), а также концентрацию самих агентов (например, рН раствора, концентрацию О2 и пр.); 
- форстеровский резонансный энергетический перенос (FRET), случай, когда происходит возбуждение второго флуорофора путём безизлучательной передачи энергии с первого флуорохрома, возбужденного лучом источника; характеризует возможность взаимодействия между двумя флуорофорами - гибкость молекулы (если они "пришиты" к разным частям одной молекулы) или ее целостность (если эта молекула подвергается гидролизу), а также расстояние между флурофорами (т.е. в насколько тесный контакт входят два помеченные вещества). 

Размещение: василеостровская площадка

Статус: эксплуатация в рабочем режиме

agilent-cary-eclipse.jpg

Основные технические характеристики

Источник оптического возбуждения Импульсная ксеноновая лампа с частотой вспышек не кратной сетевому току 80 Гц 
Длительность импульсов от 2-х микросекунд, эквивалентная мощность под пиком 75 кВт 
Два независимых монохроматора Черни – Тернера с фокальной плоскостью 0,125 м 
Оптика Шварцшильда с кварцевым покрытием оптических элементов 
Дифракционные решетки 1200 линий/мм 
Максимальная скорость сканирования спектров 24 000 нм/мин как по возбуждению, так и по эмиссии 
Выбор ширины в диапазоне 1,5 - 10 нм 
Кюветное отделение возможность работы с кюветами и планшетами 
Доступ в кюветное отделение как сверху, так и с фронтальной стороны прибора 
Возможность работы с внешней засветкой с открытым отделением для образцов 
Спектральный диапазон 190 - 1100 нм 
Гарантированные фотометрические характеристики 
В диапазоне 200 - 900 нм 
Точность установки длины волны  1.5 нм 
Спектральное разрешение 1.5 нм 
Воспроизводимость по длинам волн 0.2 нм 
Два независимых малошумящих фотоумножителя 
Чувствительность (Рамановская линия воды, время усреднения не более 1 сек) на длине волны 350 нм 750:1 
Чувствительность (Рамановская линия воды, время усреднения не более 1 сек) на длине волны 500 нм 500:1 
Скорость сбора кинетических данных 4800 точек в минуту 
Временные параметры в диапазонах флуоресценции 0,02 - 999 сек 
Временные параметры фосфоресценции 1 мкс - 10 сек 
Временные параметры био/хеми- люминесценции 40 мкс - 10 сек 
Микропланшетный считыватель для стандартных плашек на 384 позиции 
Измерение флуоресценции в стандартных плашках на 384 позиции 90 сек 
Измерение флуоресценции в стандартных плашках на 96 позиций 50 сек 
Возможность установки планшетов нестандартного размера 
Программное обеспечение, в которое входят следующие возможности - сканирование, концентрация, время жизни, измерения на заданной длине волны, измерение при изменении температуры, возможность валидирования результатов 
Автоматический поляризатор излучения возбуждения и люминесценции 
Держатель для твёрдых образцов 
Оптоволоконная приставка 
Термостатируемый многопозиционный держатель на элементах Пелтье 
Максимальное число кювет в держателе 4 
Температурный диапазон 0 – 100° С 
Стабильность поддержания температуры температуры ±0.05 C 
Максимальная разница температуры между ячейками (при 37 С) 0,2 С 
Температурный контроллер 
Температурный датчик 
Водяной насос для отвода тепла для Пелтье элемента в комплекте 
Набор магнитных мешальников, 10 шт. 
Дверь расширенного кюветного отделения для установки термостатируемых держателей 
Держатель с водяным термостатированием на одну кювету 
диапазон температур 20 - 60 С 
Циркуляционный охладитель для держателя в комплекте 

Принцип работы

В отличие от спектрофотометрии, которая оценивает поглощение, спектрофолуориметрия оценивает эмиссию. Это определяет положение детектора в приборе- под углом 900 по отношению к направлению возбуждающего луча, чтобы детектируемый сигнал минимально зашумлялся непоглощенным возбуждающим излучением. Прибор может работать в двух режимах, т.к. снабжен двумя монохроматорами - после источника возбуждения и перед детектором излучения: либо удерживается возбуждающая длина волны и снимается спектр излучения, либо, наоборот, получают кривую интенсивности излучения на одной длине волны при варьировании длины волны возбуждающего света.

Требования к образцам

Наличие молекулярного кислорода в образцах снижает интенсивность флуоресценции, поэтому желательно пробы деаэрировать.